EXPERIMENTOS CLAVE

 Martes  18 Marzo 2025

Esta mañana hemos continuado nuestros experimentos en esta ocasión en nuestro Laboratorio de Biología del Ayala. Y creo que hemos entendido hacia donde va nuestro experimento… , que consiste en 4 tipos de bacteria (1,2,5,7):

Que una vez crecidas durante dos días a 28ºC

Tubos con TY y 200 ug/ml de Kanamycin de las bacterias 1, 3, 5, y 7

Los cultivos con S meliloti se han extendido en placas (600 ul de un cultivo saturado por cada placa) para poder visualizar cómo se comportará el fago 3.2. Este fago, es sensible al sistema de resistencia UG5. Sería bueno que le echarais un vistazo a los blog previos del Ayala (https://dnafagos2.blogspot.com/ y https://dnafagos.blogspot.com/)

 Tras realizar las diluciones seriadas con un stock de fago con alto título. (debemos tener apuntadas en nuestras notas como las hemos hecho). Finalmente nos preguntamos cual será el comportamiento del fago frente a los 4 tipos distintos de bacteria:

 

Las placas ya están incubándose a 28ºC en nuestra estufa favorita. En un par de días tendremos los resultados.

Que nervios!!!!!!

Hoy si nos hemos merecido un descanso al final del día. y encima de todo, hemos estado haciendo los experimentos con cámaras de la televisión de Canal Sur. 

Hip, Hip, Hurra!!!!!

LOS RESULTADOS DE NUESTRO PRIMER PLAQUEO DE FAGOS

Nuestros primeros resultados

Tras los experimentos realizados en la EEZ, nos queda interpretar los resultados obtenidos de las distintas fotos que realizamos a las placas, esto es: 

1a Pregunta:

"¿Son nuestras colonias aisladas sólo S. meliloti o en algún caso son E coli???

Como muestran nuestros crecimientos en placa, los transconjugantes que tenemos se corresponden a tranformantes de S. meliloti, la bacteria GR4 con los distintos constructos y sin la presencia de E. coli. 

Podemos observar que solo hay E coli en nuestros puntos control (las x de las placas de endo agar (rosa).

Ya tenemos preparados los hospedadores para probar el papel de las distintas actividades presentes en nuestro sistema de resistencia UG5

2a Pregunta:

"¿Cual es la cantidad de fago presente en los tubos A, B y C???

Para ello debemos de analizar las diluciones seriadas y los plaqueos que hicimos. Os recuerdo, que repaseis vuestras notas... 

Nuestro investigador ha realizado la siguiente composición:

En el se plaquearon triplicados de cada una de las diluciones seriadas, lo que nos permite "contar" calvas de lisis e inferir la cantidad de fago presente en cada uno de los tubos (A, B y C)...

De manera paralela, se realizaron los plaqueos y se incubaron en la EEZ (los hizo Esperanza):

Como podeis observar, los resultados son equivalentes. Este hecho hace que dispongamos de 6 valores distintos a la hora de determinar la cantidad de fago presente.

Venga!!! que espero vuestros comentarios sobre el título de fago en cada tubo!!!. Cual de los tres tiene el título mas alto, cual el que menos?? . Para nota, si ademas podemos estimar el margen de error de nuestro conteo!!!

Ya estamos en disposición de realizar nuestros experimentos!!!!

Cual será el título de nuestro fago en los 4 tipos de bacteria que hemos preparado????

Animo Equipo que ya nos enfrentamos a las preguntas del proyecto!!!!